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小结（1）成品棉鞋的吸湿率不仅仅与里料有关系，帮面材料的选取也有影响成鞋整体的吸湿率作用。

检出限（LOD）为 3 倍信噪比时的浓度，定量限（LOQ）为 10 倍信噪比时的浓度。结果表明，本方法简单、快速、准确、灵敏度高、重现性良好，与现有的文献和国家标准相比，无需第 2 次离心，检测成本较低（约 5 元/样品），避免使用大量有机溶剂，减少了对环境的污染，因此可作为大量多种柑橘鲜果样品中多种农药残留的筛选和确证方法。

2.5 方法评价向 5 种柑橘基质空白样品中添加 75 种农药标准品，大部分农药的添加水平分别为 0.01、0.05 和 0.1mg/kg，而敌敌畏在温州蜜柑和金柑中，久效磷在温州蜜柑、甜橙和金柑中，硫线磷在 5 种柑橘中，硫环磷在柠檬中，炔螨特在温州蜜柑、甜橙和金柑中，甲基谷硫磷在甜橙、柚子和金柑中的添加水平分别0.02、0.05 和 0.1 mg/kg，结果如附表 1 所示。声明：本文所用图片、文字来源《农药学学报》，版权归原作者所有。此外，该方法与QuEChERS 法相比部分农药的基质效应有所减弱。该方法操作简便快捷，能在较短时间内完成 75 种农药多残留分析，具有准确度、精确度和灵敏度好等优点，适用于大批量不同品种的柑橘农药多残留检测。3 结论本研究通过优化磁性分散固相萃取-QuEChERS 前处理技术，结合气相色谱-串联质谱建立了快速检测多种柑橘基质中 75 种农药残留的方法。

在宽皮柑橘中，Me 为 0.68~14.9。一个脐橙样品中，三唑磷和联苯菊酯的残留量均大于 GB 2763-2019中规定的最大限量值（分别为 0.2 和 0.05mg/kg）。其中，F1组分中酸性氨基酸(Asp和Glu)含量占总氨基酸含量的42.64％。

声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。F4组分中碱性氨基酸含量高于酸性氨基酸含量，碱性氨基酸占氨基酸总数的37.90％。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：胃蛋白酶，酪蛋白，磺酸基，氨基酸。2、酪蛋白肽组分的电势分离得到的4组酪蛋白组分的表面电荷性质通过电势进行确定。

三、结果与分析1、酪蛋白肽的分离纯化酪蛋白水解物经SephadexC25凝胶柱分离后的谱图如图1所示。因此，F1和F2组分最先被洗脱下来，带有较多的负电荷。

随后水解液用分子截留量为500Da的透析袋透析5h，收集透析液，利用原子吸收分光光度计测定其中游离锌的含量，评价肽-锌螯合物在肠消化过程中的稳定性，同时收集透析袋内剩余物质冷冻干燥备用。F3和F4组分最后从SPsephadexC-25阳离子交换填料上洗脱下来，所带负电荷相对较少，因此电势较高。带有负电荷的组分含有相对较多的酸性氨基酸，而带有正电荷的组分含有相对较多的碱性氨基酸。当细胞在培养瓶中分布80％时，用含0.5％EDTA的胰酶消化细胞，然后以4-5105cells/mL的浓度接种于6孔Transwell培养板中。

F3和F4组分是由流动相20mM，pH4.0的醋酸缓冲液和0.5MNaCl共同洗脱获得。F2组分中酸性氨基酸含量占33.84％。采用柱前衍生法对分离得到的酪蛋白肽组分的氨基酸组成进行分析，结果如表1所示。每隔2d换一次培养液，直至细胞培养21d。

水解液用分子截留量为500Da的透析袋透析5h，收集透析液，利用原子吸收分光光度计测定其中游离锌的含量，评价肽-锌螯合物在胃消化过程中的稳定性，同时收集透析袋内剩余物质冷冻干燥备用。再结合氨基酸组成分析可知，分离得到的4组酪蛋白肽组分都可以螯合锌离子，并且螯合锌的能力从F1组分到F4组分逐渐减弱。

9、数据处理与统计分析数据结果表示为平均值标准误的形式。例如，有学者研究发现由于含有较多带负电荷的磷酸基团，酪蛋白磷酸肽在pH变化的条件下仍然能够与铁形成稳定的复合物。

将经胃肠消化后肽一锌螯合物添加至上侧，使其终浓度为1.5mg/mL，随后将添加了样品的Transwell培养板在37℃下吸收转运2h，收集培养板下侧的溶液进行透析，分别收集透析液和透析后的保留物，然后利用原子吸收分光光度计测定其中锌的含量，与吸收之前比较，计算经吸收过程后游离锌的含量及螯合物中锌的生物利用率F3和F4组分则带有较多正电荷。在模拟胃肠消化过程中，锌的解离率定义为在胃肠消化过程中释放游离锌的量占消化前酪蛋白肽-锌螯合物中锌的总量的百分比。水解液用分子截留量为500Da的透析袋透析5h，收集透析液，利用原子吸收分光光度计测定其中游离锌的含量，评价肽-锌螯合物在胃消化过程中的稳定性，同时收集透析袋内剩余物质冷冻干燥备用。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。8、肽-锌螯合物中锌的生物利用率Caco-2细胞培养于25cm2细胞培养瓶中，培养液为含有10％胎牛血清，1％非必须氨基酸，100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素的高糖培养基。

7、体外模拟肽-锌螯合物胃肠消化及锌解离率测定将制备的肽-锌螯合物溶于pH2.0，37℃去离子水中，充分混匀后向其中添加2％(w/w)的胃蛋白酶，在37℃条件下水浴摇床酶解2h。将经过胃蛋白酶消化后的肽-锌螯合物溶于37℃，pH7．0的水溶液中，充分混匀后添加2％(w/w)的胰酶，在37℃条件下水浴摇床酶解3h。

3、酪蛋白肽组分的氨基酸组成活性肽的带电性质在宏观上反映了其氨基酸组成的差异。不同的电势表明酪蛋白肽组分在水溶液中稳定性不同，同时也会影响肽与金属离子之间的相互作用以及形成金属螯合物的稳定性。

因此，F1、F2和F3可看做带负电荷的组分，掌电势较低。F2组分中酸性氨基酸含量占33.84％。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：胃蛋白酶，酪蛋白，磺酸基，氨基酸。9、数据处理与统计分析数据结果表示为平均值标准误的形式。本实验中分离酪蛋白肽采用的阳离子交换柱层析，以SPsephadexC-25作为固定相，其中以带负电荷的磺酸基(一SO3H)为主要功能团，通过静电相互作用对物质进行分离。由图1可知，共分离得到4组酪蛋白肽组分，F1和F2组分是由流动相20mM，pH4.0的醋酸缓冲液洗脱获得。

F3和F4组分最后从SPsephadexC-25阳离子交换填料上洗脱下来，所带负电荷相对较少，因此电势较高。因此，F1和F2组分最先被洗脱下来，带有较多的负电荷。

其中，F1组分中酸性氨基酸(Asp和Glu)含量占总氨基酸含量的42.64％。收集足够量的肽组分后，调节pH为7.0，冷冻干燥后在一80℃条件下存放备用。

采用柱前衍生法对分离得到的酪蛋白肽组分的氨基酸组成进行分析，结果如表1所示。F3组分中碱性氨基酸(His、Arg、Lys)含量明显高于F1和F2组分，达到15.33％。

培养条件为37℃，相对湿度90％，CO2浓度为5％。F1-F3组分中酸性氨基酸含量高于碱性氨墓酸含量。F4为带正电荷组分，亭电势较高。将经胃肠消化后肽一锌螯合物添加至上侧，使其终浓度为1.5mg/mL，随后将添加了样品的Transwell培养板在37℃下吸收转运2h，收集培养板下侧的溶液进行透析，分别收集透析液和透析后的保留物，然后利用原子吸收分光光度计测定其中锌的含量，与吸收之前比较，计算经吸收过程后游离锌的含量及螯合物中锌的生物利用率。

由于F3和F4组分的洗脱液中含有NaCI，这两组分需要经过脱盐处理。例如，有学者研究发现由于含有较多带负电荷的磷酸基团，酪蛋白磷酸肽在pH变化的条件下仍然能够与铁形成稳定的复合物。

当细胞在培养瓶中分布80％时，用含0.5％EDTA的胰酶消化细胞，然后以4-5105cells/mL的浓度接种于6孔Transwell培养板中。然后弃去培养液，用HBSS清洗细胞2-3次，在细胞模型上侧和下侧分别添加1.5mL和3mLHBSS溶液。

F3和F4组分是由流动相20mM，pH4.0的醋酸缓冲液和0.5MNaCl共同洗脱获得。随后水解液用分子截留量为500Da的透析袋透析5h，收集透析液，利用原子吸收分光光度计测定其中游离锌的含量，评价肽-锌螯合物在肠消化过程中的稳定性，同时收集透析袋内剩余物质冷冻干燥备用。